RAPIDEC CARBA NP

FUNDAMENTO:

 RAPIDEC CARBA NP es una técnica rápida para la detección de bacilos gramnegativos (BGN) productores de carbapenemasas, Enterobacterias, Pseudomonas aeruginosas y acinetobacter baumanii.

Se basa en la detección de hidrólisis del carbapenem por las bacterias productoras de carbapenemasa. Las carbapenemasas son beta-lactamasas capaces de inactivar a la mayoría de los beta-lactámicos que existen.

La hidrólisis acidifica el medio que provoca un cambio de color en el indicador de pH (rojo fenol).

Después de la lisis bacteriana, que posibilita la extracción de la enzima, añadiremos la solución de detección que contiene:

• Un carbapenem: Imipenem (sustrato de carbapenemasa).
• Rojo fenol (indicador pH).
• Zinc (requerido para la detección de cepas productoras de carbapenemasas metalodependiente).

Tras la incubación realizamos una lectura visual comparando un pocillo control sin imipenem con un pocillo de reacción que contenga imipenem.

TÉCNICA:

Materiales

• Guantes.
• Pipetas automática de 25 y 100 microlitros.
• Puntas para las pipetas.
• Rotulador.
• Temporizador.
• Muestra a estudiar (Cultivo joven < de 72 horas) .
• Estufa 37ºC.
• Galería de ensayo.
• Soporte bicolor.
• Tapadera.
• Ampolla API Suspension Medium de 2 ml.
• Bastoncillos.
• Insert de la técnica suministrado con el kit.

Preparción de la tira

• Saque la tira de su envase.
• Identificarla con el número de muestra. 

Preparación de la muestra

• Abrir la ampolla del medio de suspensión API.
• Dispensar 100 ul en los pocillos "A", "B" y "C". No utilizar solución salina.
• Coloque la tapa en la galería.
• Incubar durante 4 - 10 minutos a temperatura ambiente (15 - 25ºC)
• Mezclar suavemente el contenido del pocillo "B" con un bastoncillo.

Preparación del inóculo y lisis bacteriana

• Colocar la tira en e soporte bicolor (blanco y negro) para facilitar la comparación de turbidez en los pocillos "B" y "C".
• Con el extremo de un bastoncillo, tome varias colonias con la misma morfología teniendo cuidado de no llevarse junto a las colonias fragmentos de agar.
• Inocular el pocillo "C" hasta obtener una  turbidez igual a la del pocillo "B".
• Incubar durante 30  minutos a temperatura ambiente (15 - 25ºC).

Procedimiento

• Transferir 25 ul del pocillo "C" a los pocillos "D" y "E".
• Transferir 25 ul del pocillo "A" a los pocillos "D" y "E"
• Incubar la muestra a 33 - 38ºC.
• LEER EXACTAMENTE a los 30- 40 minutos de incubación.

Si la lectura fuera negativa o dudosa volver a incubar y ller nuevamente pasados 90 minutos .
El tiempo de incubación total de la prueba no debe superar las 2 horas.

NOTA
EN CASO DE COLONIA MUY MUICOIDES:

Las coloniaas hipermiudes pueden conducir a resultados falsos positivos o falsos negativos, por eso antes de realizar la prueba dbemos pretratarlas.

• Dispensar 150 ul de la ampolla API Suspension Medium en un tubo cónico eppendorf de 1.5 ml.
• Añadir 2 perlas de vidrio de 3 mm de diámetro.
• Utilizando  el bastoncillo tome la cantidad de muestra correspondiente a un asa calibrada de 10  ul.
• Añadir al tubo eppendorf y preparar una suspendión bacteriana
• Mezclar en el vórtex hasta que la apariencia mucosa haya desaparecido de la suspensión. (La suspensión debe poder pipetearse con facilidad).
• Reconstituir los pocillo "A" y "C"con 100 ul de la ampolla API Suspension Medium.
• Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.
• Transferir 25 ul del pocillo "C" a los pocillos "D" y "E".
• Transferir 25 ul del pocillo "A" a los pocillos "D" y "E"
• Incubar a 33 - 38ºC.
• LEER EXACTAMENTE  a los 30 - 40 minutos de incubación.

Si la lectura fuera negativa o dudosa volver a incubar y ller nuevamente pasados 90 minutos .

El tiempo de incubación total de la prueba no debe superar las 2 horas.

LECTURA E INTERPRETACIÓN:

• Colocar la tira en el soporte bicolor.
• Comparar los colores de los pocillos "D" y "E

Para más información puedes descargaar el Insert de la técnica en el siguiente enlace: 

RAPIDEC CARBA NP

Te dejo también un vídeo de YouTube en el podrás ver como se realiza la técnica.

FOTOS